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顯微鏡照明光路系統的調整
為了使顯微鏡的視野能受到均勻而又充分的照明，在顯微鏡初次安裝和調試時(shí)，就必須把照明光路系統調整好，這是正確使用顯微鏡，并獲得正確結果的重要手段和最基本的要求。此外，正確掌握照明光路系統的調整，是使用顯微鏡過(guò)程中更換光源燈泡后所必經(jīng)的步驟，也是在日常使用過(guò)程中不時(shí)地檢驗顯微鏡性能的必要手段。顯微鏡照明光路系統的調整主要有以下4項內容：
1、照明光源燈室在顯微外的初步調整
① 首先將燈室的外殼打開(kāi)，壓彈簧夾子將鹵素燈泡裝入插座中，安裝時(shí)避免手指直接接觸燈泡（可用柔軟的布或紙隔�。�，以免燈泡上留有指紋等臟物，影響燈泡的使用壽命。
② 把燈室擺在桌面上，接通電源后，用專(zhuān)用的螺絲刀調節燈的調焦旋鈕孔（標有“←→”），使燈絲投影在1-2m外的墻上，將燈絲成像調至清晰；然后調節燈的高低位置調節絲孔（標有“──”），使燈絲位置高低適當；再調節燈的左右位置調節螺絲孔（標有“──”），使燈絲左右位置合適。
2、光源發(fā)光體（燈絲）在顯微鏡內位置的檢驗和校正 目的是為了把發(fā)光體的像端端正正地調入物鏡的視域范圍內，從光源的角度去確保顯微鏡的視域受到充分而均勻的照明，這是調整庫勒照明系統的前提條件。需要的基本工具：對中望遠鏡購置顯微鏡時(shí)已配備。
① 拔掉燈庫內的毛玻璃套筒，把燈室裝回顯微鏡上；
② 選用10×物鏡，開(kāi)亮光源程序找樣品并調焦清晰，再換用40×物鏡把樣品調焦清晰（40×物鏡可以看清燈絲的全貌）；
③ 把聚光鏡的孔徑光闌和視場(chǎng)光闌均開(kāi)到最大；
④ 拔掉其中一個(gè)目鏡，換上對中望遠鏡，抓住白色部分，另一手伸縮黑色接目鏡，就可在視野中看到燈絲像；
⑤ 如燈絲位置不合適，調“──”孔，把燈絲像沿水平方向調好，調“──”孔，把絲像沿垂直方向調好，直至將燈絲像調至剛好充滿(mǎn)物鏡孔徑的光圓像；
⑥ 調整完畢后，將毛玻璃套筒插回原位，拔掉對中望遠鏡，換回目鏡作下一步調整。以上所述照明光源燈室在顯微鏡外的調整和光源發(fā)光體在顯微鏡內位置的校驗，只需在顯微鏡初次安裝調試及更換燈泡時(shí)進(jìn)行，平時(shí)使用顯微鏡時(shí)不能隨意亂調亂動(dòng)。萬(wàn)一調亂時(shí)，可按上述步驟調回原狀。
3、庫勒照明（Kohler）系統的正確調整 顯微鏡的正確調試，主要工作之一是照明光路系統的調整，而其中的關(guān)鍵是庫勒照明系統的調整。對于每一位使用顯微鏡的人員，特別是作顯微照像的人員來(lái)說(shuō)，應該對庫勒照明系統的原理及其調整步驟有一定的了解和掌握，才能充分發(fā)揮顯微鏡應有的功能，拍出來(lái)的照片才能在效果上比較一致而又完善。庫勒照明系統的原理簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是：光源發(fā)光體上任意一點(diǎn)發(fā)出的光，可以照明顯微鏡的視域范圍，而光源發(fā)光體上每一點(diǎn)所發(fā)出的光匯集起來(lái)，在顯微鏡的視域中就實(shí)現了非常充分而又均勻的照明。調整庫勒照明系統的目的，是為了使所觀(guān)察的視域能獲得均勻而又充分的照明，防止雜散光對照像系統造成影響或干擾，以免照像時(shí)在底片形成灰霧。高調整庫勒照明系統的必要部件：視場(chǎng)光闌、可進(jìn)行合軸調整的聚光鏡系統。
① 選用10×物鏡和10×目鏡；
② 把聚光鏡前端透鏡擺進(jìn)光路中，孔徑光闌調至適中的位置上（不大不�。�，再把聚光鏡升到最頂的位置上，聚光鏡轉盤(pán)調至明視野“J”位置；
③ 把視場(chǎng)光闌調至最�。�0.1）；
④ 載物臺上放上已封片的生物樣品，開(kāi)亮光源，調焦清晰；
⑤ 視域中會(huì )出現一個(gè)局部照明的區域或亮斑，這是視場(chǎng)光闌的模糊像，在其中可以清晰地看到樣品的細節；在它之外是較暗的視域，不一定能把樣品的細節看得清楚；
⑥ 把聚光鏡微微地向下調，使視野中的亮斑逐漸收小，慢慢變成一個(gè)清晰的多邊形象，這便是視場(chǎng)光闌的清晰像；
⑦ 一般情況下，多邊形象并不在視域中央，需要調整聚光鏡的一對調中螺絲，把視場(chǎng)光闌多邊形的像調至中央位置；
⑧ 逐漸開(kāi)大視場(chǎng)光闌，使多邊形象成為視域的內接多邊形，進(jìn)一步核對調中的狀況，如對中不夠理想，繼續微微調對中螺絲；
⑨ 將視場(chǎng)光闌稍為再微微開(kāi)大一些，使它的多邊形象恰好消失在視域的邊緣上，至此，庫勒照明系統調整完畢。庫勒照明系統調整好以后，整個(gè)視域照明均勻，拍攝的顯微照片明亮清晰，反差正常。在日后使用過(guò)程中應特別注意： a. 視場(chǎng)光闌不可任意開(kāi)大，但可隨物鏡倍數的增大而將視場(chǎng)光闌收小，隨物鏡倍數的減小而開(kāi)大； b. 聚光鏡的高低位置不準亂調，否則會(huì )破壞已調整好的庫勒照明系統； c. 使用10×以下物鏡時(shí)要將聚光鏡前端透鏡擺出光路外，使用10×或10×以上物鏡時(shí)要將前端透鏡擺入光路中； d. 關(guān)于物鏡倍數與視場(chǎng)光闌大小配合問(wèn)題，在實(shí)際使用過(guò)程中，作為一般觀(guān)察不一定要收小或開(kāi)大視場(chǎng)光闌，但作顯微照相時(shí)，為了避免雜散光線(xiàn)對照相系統的干擾，以便能拍攝到較完善的照片，則應在使用每一個(gè)倍數的物鏡時(shí)，把視場(chǎng)光闌調節到正好消失于所觀(guān)察的視域邊上，這是比較繁復的工作，但又非做不可。較為簡(jiǎn)便的方法是把與各個(gè)倍數物鏡相對應的視場(chǎng)光闌事先調整好，并作好記號，以后使用時(shí)根據記號直接調至相應的位置。
4、孔徑光闌的正確使用 由于聚光鏡的孔徑光闌可以影響顯微鏡的分辨率，使用時(shí)應掌握正確的使用方法。過(guò)去由于對孔徑光闌的認識不足，往往把它當作是調節視野亮度的工具。雖然調節孔徑光闌在一定程度上可以改變視野的亮度，但會(huì )直接影響成像的反差、對比度及分辨率，在使用過(guò)程中應盡可能避免。為了發(fā)揮聚光鏡孔徑光闌的作用，以便在觀(guān)察時(shí)，尤其在作顯微照相時(shí)獲得最佳分辨率，在每換用一個(gè)倍數的物鏡時(shí)，在樣品調焦清晰后，需要調節孔徑光闌，使它的大小正好等于所用物鏡數值孔徑（物鏡孔徑像）的2/3 。 調整方法是用對中望遠鏡對焦于視野中黑色相差環(huán)上，調節孔徑光闌，可以看到一個(gè)多邊形的孔徑光闌像，然后調到等于物鏡孔徑像的2/3，即介于黑色相差環(huán)外與圓形視域內之間。為方便起見(jiàn)，可把與各倍數物鏡相對應的孔徑光闌預先調整好，并作好標記，以免每次使用都要重新調整。
添加日期：2009-12-19
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